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病毒采樣管廠家談新型冠狀病毒的核酸檢測方法

2020-09-27 00:00:00

一、樣本采集

預約采樣,每日上午、下午分別采集一批樣本,由穿戴三級生物安全防護裝備的醫護人員采集患者的咽拭子,對于多次咽拭子檢測為陽性或高度疑似的患者,進一步采集痰液或肛門拭子。

二、樣本包裝、運送及接收

收集樣品后,將其放入病毒采樣管中并冷凍,試管外貼條碼。用75%的乙醇噴灑一次性病毒采樣后放在密封袋。每個包裝僅限存放一個樣品。樣本由專門人員送到實驗室。接待人員對箱子的外表面進行消毒,用75%的乙醇噴灑運輸樣品運輸箱表面,將其打開再對箱子進行乙醇消毒。最后,取出樣品運輸箱并在生物安全柜中打開,檢查樣品數量是否正確,樣品管是否完好,有無破損泄漏。

三、提取樣本核酸

通過磁珠法提取核酸RNA,為擴增核酸,使用新冠病毒開放閱讀碼框和基因編碼核衣白核蛋白基因特異性保守序列為靶區,構建雙靶基因。與PCR反應溶液結合使用可以通過在定量PCR熒光儀上改變熒光信號來進行RNA檢測。

四、檢測結果分析

實驗中使用的PCR檢測系統包括內源內標引物,可通過確定正常內標來監控樣本采集、核酸提取及擴增情況,有效減少假陰性檢測結果。在每個批次的實驗中建立三個陰性質量對照和一個關鍵的陽性質量對照,將它們隨機插入樣品中同時檢測,以監控實驗結果的可靠性。分析結果時應首先檢查陰性和陽性質量控制結果,陰性質量控制品的FAM和ROX通道都沒有Ct值或Ct值大于40,陽性質量控品FAM, ROX通道和內標通道HEX的Ct值小于等于35。如果質控產品的結果滿足上述要求,則實驗結果有效,否則結果無效,需重新測試。

每個測試樣品的結果應參考試劑盒說明,分析結果如下:(1)如果FAM或ROX通道檢測出典型S型擴增曲線,Ct值小于等于40,可以報告為樣品中SARS-CoV-2核酸陽性。(2)如果FAM和ROX通道都未測得典型S型擴增曲線,無Ct值或Ct值大于40, HEX通道測得S型擴增曲線,Ct值小于等于40,則樣本可以判斷為SARS-CoV-2樣本核酸陰性。(3)如果FAM,ROX,HEX通道均未測得典型S型擴增曲線,且沒有Ct值或Ct值大于40,則表示樣本細胞含量低或反應被抑制,樣品測試結果無效,需找到原因并消除,重新測試及安全防護。

病毒采樣管


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